超濾離心管超濾率受影響因素
更新時(shí)間:2020-01-17 點(diǎn)擊次數(shù):1542次
超濾常用于分離溶液中極其微小的顆粒和不溶分子。終目的是較大限度的回收目標(biāo)溶質(zhì)。雖然分離效果受到包括化學(xué)性質(zhì)、電荷等多種因素影響,這種方法主要還是以分子大小為基本的考慮。超濾膜截留1-1000kDa(MW)的分子,鹽和水等小分子會(huì)透過(guò),因此在大分子樣品處理中得到了廣泛應(yīng)用。
超濾離心管就是一個(gè)簡(jiǎn)單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管。目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標(biāo)體積而定。可重復(fù)使用,使用一次就扔掉太浪費(fèi)。
離心超濾管會(huì)有一個(gè)類似于內(nèi)管和外管的兩個(gè)部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時(shí),分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內(nèi)管中),就是超濾的原理。
超濾離心管超濾率受影響因素
超濾過(guò)程中需要在速率和回收率之間平衡以期獲得較好好的效果。濾膜的通量的定義是流量除以面積,使用高 NMWL濾膜可以增加通量,但同時(shí)會(huì)降低回收率。選擇膜和裝置時(shí)需要同時(shí)考慮截留分子量和通量。而參與影響通量的因素很多,包括:壓力:較為稀釋的蛋白溶液或膠體懸液進(jìn)行超濾時(shí),流量隨著跨膜壓力(TMP)的增大而增加。正壓條件下操作,如 Stirred Cell 攪拌式超濾杯,這種因素影響較為明顯。如果極化影響顯著,通量會(huì)達(dá)到一個(gè)平臺(tái),甚至可能隨著壓力的增加而降低。
濃度:當(dāng)需要截留的樣品濃度很低時(shí),通量通常不受濃度影響。操作過(guò)程中,隨著溶質(zhì)濃度的升高,增加的粘滯性和極化將導(dǎo)致通量降低。溫度:通常增加操作時(shí)的溫度可以提高超濾效率。每增加1℃蛋白擴(kuò)散率增加3-3.5%,同時(shí)溶液粘度降低。實(shí)踐中一般是以樣品和設(shè)備能耐 受的高溫度來(lái)操作。pH:改換溶液和/或pH常常改變分子結(jié)構(gòu),蛋白尤其如此。在蛋白的pI值蛋白會(huì)沉淀,產(chǎn)生堵塞和得率損失。污垢:溶液中除了目的分子造成的濃差極化,還有其它小顆粒和分子會(huì)在膜上富集和沉淀,逐漸堆積在膜孔上或膜孔結(jié)構(gòu)中,形成結(jié)晶和沉淀。